Ako však rozpoznať polohu fragmentov? Na to je potrebné použiť „sondu“, to znamená malý fragment DNA označený rádioaktívnym izotopom alebo radikálom, ktorý za určitých podmienok vyžaruje svetlo. Sonda, ktorá je tiež fragmentom DNA, obsahuje sekvenciu, ktorá dopĺňa iba jeden typ invariantnej sekvencie, ktorá je už známa v prítomnom fragmente, čo umožňuje väzbu oboch.
Použitím fotografického filmu sa zistí poloha sondy, a teda aj fragmentu. V prípade miest s jedným miestom - ktoré sa v celom genóme vyskytujú iba raz - vždy existujú dve „alely“, pretože bunky (okrem reprodukčných) majú jeden pár každého chromozómu. Pretože alely majú rovnakú základnú sekvenciu a rozdielne veľkosti, sonda komplementárna k tejto sekvencii sa naviaže na obe a objavia sa na rôznych pozíciách fotografického filmu. Všetci ľudia dostávajú jednu z týchto alel od matky a jednu od otca.
Preto v teste otcovstva stačí porovnať alely matky, jej dieťaťa (a) a domnelého otca a zhoda otcovskej alely dieťaťa s alelou domnelého otca potvrdí otcovstvo „Biologický“. Ak chcete iba zistiť totožnosť osoby (napríklad zločinca), musíte porovnajte vzor polymorfizmu vzoriek DNA získaných na mieste činu so vzorcami niekoľkých podozriví.
Syntéza fragmentov DNA
Na detekciu polymorfizmu sa používajú primery, ktoré ohraničujú oblasti DNA, kde sú nukleotidové opakovania (v skupinách po dvoch, troch alebo viacerých). To znamená, že také priméry vymedzujú syntézu nových vlákien do úseku opakovaním, ktoré sa nachádza medzi miestami, na ktoré sa viažu. Takéto opakovania sa nazývajú STR (krátke tandemové opakovania alebo „krátke opakovania v sériách“) a oblasti, kde sa vyskytujú, sú známe ako „mikrosatelity“.
mitochondriálna DNA
Okrem genómovej DNA prítomnej v jadre buniek sa nachádza aj DNA v mitochondriách, organelách nachádzajúcich sa v cytoplazme. Táto DNA je oveľa menšia ako jadrová a má kruhovú štruktúru, vďaka ktorej sa viac podobá baktériám.
V kontexte forenznej analýzy vzrástol záujem o mitochondriálnu DNA z niekoľkých dôvodov: po prvé, táto DNA obsahuje aj polymorfné oblasti, ktoré umožňujú jej individualizáciu; po druhé, potomkovia dostávajú túto DNA iba od matky, čo umožňuje vystopovať rodovú líniu človeka; a po tretie, táto DNA je odolnejšia voči degradácii ako jadrová DNA. Takže pri veľkých katastrofách (požiare, výbuchy, havárie lietadla atď.), Keď je ťažšie identifikovať telá, sa analyzuje mitochondriálna DNA. Toto je extrahované z pozostatkov a sledovaná sekvencia je porovnaná so sekvenciami získanými od súrodencov alebo predkov matky.
Stupeň dôveryhodnosti testovania DNA
Jedným bodom, ktorý vyvolal intenzívnu diskusiu medzi laboratóriami a agentúrami na testovanie DNA, je počet polymorfných lokusov potrebných na spoľahlivé stanovenie identity a otcovstva. Index použitý pre závery, pokiaľ ide o totožnosť osoby a otcovstvo, závisí od počtu analyzovaných lokusov. Na dosiahnutie adekvátneho indexu je však potrebné vziať do úvahy frekvenciu alel v populácii: ak sú veľmi časté, výsledky analýz budú mierne povedané pochybné.
Ako príklad možno uviesť krvné skupiny (A, B, O a AB). Takéto skupiny, ktoré závisia od kombinácie alel, sú distribuované v populáciách po celom svete so známymi frekvenciami. V Nemecku má 46% až 48% krv typu A. V strednej Eurázii, Indii, Mongolsku a na Sibíri prevláda typ B. V žiadnej z týchto oblastí by sa preto tieto krvné skupiny nemohli izolovane použiť na identifikáciu jednotlivca, pretože veľké percento populácie by malo jednu alebo druhú. Je dôležité, aby vyšetrované alely boli zriedkavé.
V prípade DNA polymorfizmu (RFLP) sú frekvencie oveľa nižšie. Ako príklad si predstavme spor o otcovstvo v Riu de Janeiro, kde sa používa lokus D10S28 ako sonda, ktorá umožňuje získať u predpokladaného otca alelu, ktorá sa vyskytuje u približne 2,8% populácie Rio de Janeiro. Táto hodnota je veľmi vysoká, ak vezmeme do úvahy, že populácia mesta je okolo 8 miliónov obyvateľov. Na zníženie tejto hodnoty je potrebné hľadať ďalšie lokusy u toho istého jedinca. Poďme si predstaviť, že druhá analýza pomocou lokusu D2S44 odhalila alelu s frekvenciou 7,28%, čo je percento, ktoré naznačuje existenciu 582 000 ľudí v Riu de Janeiro s touto alelou.
Koľko jedincov by však malo obe alely? Iba 16 307. Toto číslo sa získa vynásobením inverznej hodnoty dvoch frekvencií: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 miliónov. Ak použijete ešte jedno miesto, bude analýza indikovať inú frekvenciu, čo vám umožní ďalšie zníženie percenta. V praxi vedie použitie piatich až siedmich sond k dostatočne nízkej hodnote na to, aby bol výsledok presvedčivý.
Zdroj: Brazílska škola - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm