Но как да разпознаем позицията на фрагментите? За това е необходимо да се използва „сонда“, т.е. малък фрагмент от ДНК, маркиран с радиоактивен изотоп или с радикал, който излъчва светлина при определени условия. Също като ДНК фрагмент, сондата съдържа последователност, която допълва само един вид инвариантна последователност, която вече е известна в изследвания фрагмент, което ще позволи свързването и на двете.
С използването на фотографски филм се открива позицията на сондата и следователно на фрагмента. В случай на сайтове с един сайт - които се срещат само веднъж в целия геном - винаги има два „алела“, тъй като клетките (с изключение на репродуктивните) имат по една двойка от всяка хромозома. Тъй като алелите имат една и съща основна последователност и различни размери, сонда, допълваща тази последователност, ще се свърже и с двете, и те ще се появят в различни позиции на фотографския филм. Всички хора получават един от тези алели от майката и един от бащата.
Следователно в теста за бащинство е достатъчно да се сравнят алелите на майката, нейното дете (а) и предполагаемия баща и съвпадението на бащиния алел на детето с алела на предполагаемия баща ще потвърди бащинството „Биологичен“. Когато искате само да разследвате самоличността на човек (престъпник например), трябва сравнете модела на полиморфизъм на ДНК проби, получени на местопрестъплението, с моделите на няколко заподозрени.
Синтез на фрагменти от ДНК
За да се открие полиморфизмът, се използват праймери, които фланкират области на ДНК, където има нуклеотидни повторения (в групи от по две, три или повече). Това означава, че такива праймери ограничават синтеза на новите нишки до участъка с повторенията, разположени между местата, към които се свързват. Такива повторения се наричат STR (Short Tandem Repeats, или „кратки повторения в серия“), а регионите, в които се намират, са известни като „микросателити“.
митохондриална ДНК
В допълнение към геномната ДНК, присъстваща в ядрото на клетките, има и ДНК в митохондриите, органели, разположени в цитоплазмата. Тази ДНК е много по-малка от ядрената и има кръгова структура, което я прави по-подобна на тази на бактериите.
В контекста на съдебния анализ интересът към митохондриалната ДНК възниква по няколко причини: първо, тази ДНК съдържа също полиморфни области, които позволяват нейната индивидуализация; второ, потомците получават тази ДНК само от майката, което прави възможно проследяването на майчиния произход на човек; и трето, тази ДНК е по-устойчива на разграждане от ядрената ДНК. Така при големи бедствия (пожари, експлозии, самолетни катастрофи и т.н.), когато е по-трудно да се идентифицират телата, се анализира митохондриалната ДНК. Това се извлича от останките и интересуващата се последователност се сравнява с последователностите, получени от братя и сестри или предци по майчина линия.
Степен на доверие на ДНК тестването
Една точка, която породи интензивна дискусия между лабораториите и агенциите за тестване на ДНК, е броят на полиморфните локуси, необходими за надеждно установяване на идентичността и бащинството. Индексът, използван за заключенията, както за самоличността на човек, така и за бащинството, зависи от броя на анализираните локуси. За да се стигне до адекватен индекс обаче, е необходимо да се вземе предвид честотата на алелите в популацията: ако те са много чести, резултатите от анализите ще бъдат най-малкото съмнителни.
Като пример могат да се използват кръвни групи (A, B, O и AB). Такива групи, които зависят от комбинацията от алели, са разпределени в популации по света с известни честоти. В Германия 46% до 48% имат кръв тип А. В Централна Евразия, Индия, Монголия и Сибир преобладава тип В. Следователно в нито един от тези региони тези кръвни групи не биха могли да се използват изолирано за идентифициране на индивид, тъй като голям процент от населението би имал едното или другото. Важно е изследваните алели да са рядкост.
В случай на ДНК полиморфизми (RFLP), честотите са много по-ниски. Като пример, нека си представим спор за бащинство в Рио де Жанейро, където се използва локусът D10S28 като сонда, позволяваща да се получи у предполагаемия баща алел, който се среща при приблизително 2,8% от населението на Рио де Жанейро. Тази стойност е много висока, ако вземем предвид, че населението на града е около 8 милиона жители. За да се намали тази стойност, е необходимо да се търсят други локуси в същия индивид. Нека си представим, че втори анализ, използващ локуса D2S44, разкрива алел с честота 7,28%, процент, който показва съществуването на 582 000 души в Рио де Жанейро с този алел.
Но колко индивида биха имали и двата алела? Само 16 307. Това число се получава чрез умножаване на обратната на двете честоти: 2,8 / 100 х 7,28 / 100 х 8 милиона. Използвайки още един локус, анализът ще посочи друга честота, което ви позволява допълнително да намалите процента. На практика използването на пет до седем сонди генерира достатъчно ниска стойност, за да бъде резултатът убедителен.
Източник: Бразилско училище - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm