Али како препознати положај фрагмената? За ово је неопходно користити „сонду“, односно мали фрагмент ДНК обележен радиоактивним изотопом или радикалом који емитује светлост под одређеним условима. Будући да је такође ДНК фрагмент, сонда садржи секвенцу која допуњује само једну врсту инваријантне секвенце која је већ позната у фрагменту који се проучава, што ће омогућити везивање оба.
Употребом фотографског филма открива се положај сонде и, према томе, фрагмента. У случају локација са једним местом - која се јављају само једном у целом геному - увек постоје два „алела“, јер ћелије (осим репродуктивних) имају по пар хромозома. Како алели имају исту основну секвенцу и различите величине, сонда комплементарна тој секвенци везаће се за обе и појавит ће се у различитим положајима на фотографском филму. Сви људи добијају један од ових алела од мајке, а један од оца.
Стога је у тесту очинства довољно упоредити алеле мајке, њеног сина (а) и наводног оца, и подударност дететовог алела с оцем са алелом наводног оца потврдиће очинство „Биолошки“. Када желите да истражите само идентитет особе (на пример, криминалца), морате упоредите образац полиморфизма узорака ДНК добијених на месту злочина са обрасцима неколико осумњичени.
Синтеза фрагмената ДНК
Да би се открио полиморфизам, користе се прајмери који бокују регионе ДНК где постоје нуклеотидне репете (у групама од две, три или више). То значи да такви прајмери ограничавају синтезу нових праменова до истезања са понављањима, смештеним између места за која се вежу. Таква понављања називају се СТР (кратка тандемска понављања, или „кратка понављања у низу“), а региони у којима се налазе познати су као „микросателити“.
митохондријска ДНК
Поред геномске ДНК, присутне у језгру ћелија, постоји и ДНК у митохондријима, органелама смештеним у цитоплазми. Ова ДНК је много мања од нуклеарне и има кружну структуру, што је чини сличнијом бактеријама.
У контексту форензичке анализе, интересовање за митохондријску ДНК појавило се из неколико разлога: прво, ова ДНК такође садржи полиморфне регионе који омогућавају њену индивидуализацију; друго, потомци добијају ову ДНК само од мајке, што омогућава праћење материнске лозе особе; и треће, ова ДНК је отпорнија на разградњу од нуклеарне ДНК. Тако се у великим катастрофама (пожари, експлозије, падови авиона итд.), Када је теже идентификовати тела, анализира митохондријска ДНК. Ово се издваја из остатака и секвенца од интереса упоређује се са секвенцама добијеним од браће и сестара или предака по мајци.
Поузданост ДНК тестирања
Једна тачка која је покренула интензивну расправу међу лабораторијама и агенцијама за испитивање ДНК је број полиморфних локуса потребних за поуздано утврђивање идентитета и очинства. Индекс који се користи за закључке, како о идентитету особе, тако и о очинству, зависи од броја анализираних локуса. Да би се дошло до адекватног индекса, међутим, потребно је узети у обзир учесталост алела у популацији: ако су врло чести, резултати анализа биће бар сумњиви.
Као пример могу се користити крвне групе (А, Б, О и АБ). Такве групе, које зависе од комбинације алела, распоређене су у популацијама широм света са познатим фреквенцијама. У Немачкој, 46% до 48% има крв типа А. У Централној Евроазији, Индији, Монголији и Сибиру превладава тип Б. Стога се ни у једном од ових региона ове крвне групе не би могле изоловано користити за идентификацију појединца, јер би велики проценат популације имао једно или друго. Важно је да су истражени алели ретки.
У случају ДНК полиморфизама (РФЛП), фреквенције су много мање. Као пример, замислимо спор о очинству у Рио де Јанеиру где се користи локус Д10С28 као сонда, која омогућава наводном оцу добијање алела који се јавља у приближно 2,8% становништва Рио де Жанеира. Ова вредност је врло висока ако узмемо у обзир да градско становништво броји око 8 милиона становника. Да бисте смањили ову вредност, потребно је потражити друге локусе код исте особе. Замислимо да је друга анализа, користећи локус Д2С44, открила алел са фреквенцијом од 7,28%, проценат који указује на постојање 582 000 људи у Рио де Жанеиру са овим алелом.
Али колико би појединаца имало оба алела? Само 16.307. Овај број се добија множењем инверзне две фреквенције: 2,8 / 100 к 7,28 / 100 к 8 милиона. Користећи још један локо, анализа ће указати на другу фреквенцију, што вам омогућава да додатно смањите проценат. У пракси, употреба пет до седам сонди генерише вредност довољно ниску да резултат буде коначан.
Извор: Бразил Сцхоол - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm