Men hvordan gjenkjenne fragmentenes posisjon? For dette er det nødvendig å bruke en "probe", det vil si et lite fragment av DNA merket med en radioaktiv isotop eller med en radikal som avgir lys under visse forhold. Sonden er også et DNA-fragment, og inneholder en sekvens som bare utfyller en type invariant sekvens som allerede er kjent i fragmentet under studiet, som vil tillate binding av begge.
Ved bruk av fotografisk film oppdages posisjonen til sonden og derfor fragmentet. Når det gjelder enkeltstedssteder - som bare forekommer en gang i hele genomet - er det alltid to "alleler", fordi celler (unntatt reproduktive) har ett par av hvert kromosom. Ettersom allelene har samme grunnleggende sekvens og forskjellige størrelser, vil en probe som er komplementær til den sekvensen, binde seg til begge, og de vil vises i forskjellige posisjoner på den fotografiske filmen. Alle mennesker mottar en av disse allelene fra moren og en fra faren.
Derfor er det i farskapstesten nok å sammenligne allelene til moren, sønnen (a) og den antatte faren, og tilfeldigheten av barnets alleler med en allel av den antatte faren vil bekrefte farskapet “Biologisk”. Når du bare vil undersøke identiteten til en person (for eksempel en kriminell), må du sammenligne polymorfismønsteret til DNA-prøver oppnådd på åstedet med mønstrene til flere mistenkte.
Syntese av DNA-fragmenter
For å oppdage polymorfismen brukes primere som flankerer områder av DNA der det er nukleotidgjentakelser (i grupper på to, tre eller flere). Dette betyr at slike primere avgrenser syntesen av nye tråder til strekningen med repetisjonene, plassert mellom stedene de binder seg til. Slike repetisjoner kalles STR (Short Tandem Repeats, eller "korte repetisjoner i serie"), og regionene der de finnes er kjent som "mikrosatellitter".
mitokondrie-DNA
I tillegg til genomisk DNA, som er tilstede i cellens kjerne, er det også DNA i mitokondrier, organeller som ligger i cytoplasmaet. Dette DNA er mye mindre enn kjernefysisk og har en sirkulær struktur, noe som gjør det mer som bakterier.
I sammenheng med rettsmedisinsk analyse oppsto interessen for mitokondrie-DNA av flere grunner: først inneholder dette DNA også polymorfe regioner som tillater dets individualisering; for det andre mottar etterkommere dette DNA bare fra moren, noe som gjør det mulig å spore en persons morslinje; og for det tredje er dette DNA mer motstandsdyktig mot nedbrytning enn nukleært DNA. I større katastrofer (branner, eksplosjoner, flyulykker osv.), Når det er vanskeligere å identifisere likene, blir mitokondrie-DNA analysert. Dette ekstraheres fra restene, og sekvensen av interesse blir sammenlignet med sekvenser hentet fra søsken eller mors forfedre.
Grad av tillit til DNA-testing
Et poeng som har skapt intens diskusjon blant laboratorier og DNA-testbyråer, er antallet polymorfe steder som trengs for å pålitelig etablere identitet og farskap. Indeksen som brukes for konklusjoner, både på identiteten til en person og på farskap, avhenger av antall analyserte lokus. For å komme til en tilstrekkelig indeks er det imidlertid nødvendig å ta hensyn til frekvensen av alleler i befolkningen: hvis de er veldig vanlige, vil resultatene av analysene i det minste være tvilsomme.
Blodgrupper (A, B, O og AB) kan brukes som et eksempel. Slike grupper, som er avhengig av kombinasjonen av alleler, er fordelt i populasjoner over hele verden med kjente frekvenser. I Tyskland har 46% til 48% type A-blod. I Sentral-Eurasia, India, Mongolia og Sibir råder type B. I ingen av disse regionene kunne disse blodgruppene derfor brukes isolert for å identifisere et individ, fordi en stor andel av befolkningen ville ha den ene eller den andre. Det er viktig at de undersøkte allelene er sjeldne.
Når det gjelder DNA-polymorfier (RFLP), er frekvensene mye lavere. La oss for eksempel forestille oss en farskapstvist i Rio de Janeiro der D10S28-locus brukes som en sonde, som tillater å skaffe, i den antatte faren, en allel som forekommer i omtrent 2,8% av befolkningen i Rio de Janeiro. Denne verdien er veldig høy hvis vi vurderer at byens befolkning er rundt 8 millioner innbyggere. For å redusere denne verdien er det nødvendig å søke etter andre steder i samme person. La oss forestille oss at en ny analyse, ved hjelp av D2S44-locus, avslørte en allel med en frekvens på 7,28%, en prosentandel som indikerer eksistensen av 582 000 mennesker i Rio de Janeiro med denne allelen.
Men hvor mange individer ville ha begge alleler? Bare 16.307. Dette tallet oppnås ved å multiplisere det inverse av de to frekvensene: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 millioner. Ved å bruke ett annet sted vil analysen indikere en annen frekvens, slik at du kan redusere prosentandelen ytterligere. I praksis genererer bruk av fem til syv sonder en verdi som er lav nok til at resultatet blir avgjørende.
Kilde: Brasilskolen - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm