Mutta kuinka tunnistaa fragmenttien sijainti? Tätä varten on välttämätöntä käyttää "koetinta", toisin sanoen pientä DNA-fragmenttia, joka on leimattu radioaktiivisella isotoopilla tai radikaalilla, joka lähettää valoa tietyissä olosuhteissa. Koska koetin on myös DNA-fragmentti, se sisältää sekvenssin, joka täydentää vain yhtä tutkittavassa fragmentissa jo tunnettua invarianttisekvenssin tyyppiä, mikä sallii molempien sitoutumisen.
Valokuvafilmiä käytettäessä koettimen ja siten fragmentin sijainti havaitaan. Yksittäispaikoissa - joita esiintyy vain kerran koko genomissa - on aina kaksi "alleelia", koska soluissa (lukuun ottamatta lisääntyviä) on yksi pari kutakin kromosomia. Koska alleeleilla on sama perussekvenssi ja eri koot, tälle sekvenssille täydentävä koetin sitoutuu molempiin ja ne ilmestyvät valokuvakalvon eri paikoissa. Kaikki ihmiset saavat yhden näistä alleeleista äidiltä ja toisen isältä.
Siksi isyyskokeessa riittää verrata äidin, hänen lapsensa (a) ja oletetun isän alleeleja, ja lapsen isän alleelin samanaikaisuus oletetun isän alleelin kanssa vahvistaa isyyden "Biologinen". Kun haluat tutkia vain henkilön (esimerkiksi rikollisen) henkilöllisyyden, sinun on vertaa rikospaikalla saatujen DNA-näytteiden polymorfismia useiden kuvioiden kanssa epäiltyjä.
DNA-fragmenttien synteesi
Polymorfismin havaitsemiseksi käytetään alukkeita, jotka reunustavat DNA: n alueita, joissa on nukleotiditoistoja (kahden, kolmen tai useamman ryhmän ryhmissä). Tämä tarkoittaa, että tällaiset alukkeet rajaavat uusien säikeiden synteesi venytykseen toistojen kanssa, jotka sijaitsevat niiden kohtien välillä, joihin ne sitoutuvat. Tällaisia toistoja kutsutaan nimellä STR (lyhyet tandemtoistot tai "lyhyet toistot sarjoissa"), ja alueet, joissa ne esiintyvät, tunnetaan nimellä "mikrosatelliitit".
mitokondrioiden DNA
Solutumassa läsnä olevan genomisen DNA: n lisäksi DNA on myös mitokondrioissa, sytoplasmassa sijaitsevissa organelleissa. Tämä DNA on paljon pienempi kuin ydin ja sillä on pyöreä rakenne, mikä tekee siitä enemmän bakteerien kaltaisen.
Oikeuslääketieteellisen analyysin yhteydessä kiinnostus mitokondrioiden DNA: ta kohtaan syntyi useista syistä: ensinnäkin tämä DNA sisältää myös polymorfisia alueita, jotka mahdollistavat sen yksilöimisen; toiseksi jälkeläiset saavat tämän DNA: n vain äidiltä, mikä tekee mahdolliseksi jäljittää henkilön äidin suku; ja kolmanneksi tämä DNA on vastustuskykyisempi hajoamiselle kuin ydin-DNA. Siten suurkatastrofeissa (tulipalot, räjähdykset, lentokoneiden onnettomuudet jne.), Kun ruumiiden tunnistaminen on vaikeampi, mitokondrioiden DNA analysoidaan. Tämä uutetaan jäännöksistä ja kiinnostavaa sekvenssiä verrataan sekvensseihin, jotka on saatu sisaruksilta tai äidin esi-isiltä.
Älä lopeta nyt... Mainonnan jälkeen on enemmän;)
DNA-testauksen luottamusaste
Yksi asia, joka on herättänyt kiivasta keskustelua laboratorioiden ja DNA-testausvirastojen keskuudessa, on identiteetin ja isyyden luotettavaan määrittämiseen tarvittavien polymorfisten lokusten määrä. Sekä henkilön henkilöllisyydestä että isyydestä johtuviin päätelmiin käytetty indeksi riippuu analysoitujen lokien lukumäärästä. Riittävän indeksin saavuttamiseksi on kuitenkin otettava huomioon alleelien esiintymistiheys populaatiossa: jos ne ovat hyvin yleisiä, analyysien tulokset ovat lievästi sanottuna epäilyttäviä.
Veriryhmiä (A, B, O ja AB) voidaan käyttää esimerkkinä. Sellaiset ryhmät, jotka riippuvat alleelien yhdistelmästä, jakautuvat populaatioihin ympäri maailmaa tunnetuilla taajuuksilla. Saksassa 46-48%: lla on A-tyypin verta. Keski-Euraasiassa, Intiassa, Mongoliassa ja Siperiassa tyyppi B on vallitseva. Minkään näistä alueista ei näin ollen voisi käyttää näitä veriryhmiä erillään yksilön yksilöimiseksi, koska suurella prosentilla väestöstä olisi yksi tai toinen. On tärkeää, että tutkitut alleelit ovat harvinaisia.
DNA-polymorfismien (RFLP) tapauksessa taajuudet ovat paljon pienemmät. Kuvitellaanpa esimerkiksi isyyskiista Rio de Janeirossa, jossa käytetään D10S28-lokusta koettimena, jolloin oletetusta isästä saadaan alleeli, jota esiintyy noin 2,8%: lla Rio de Janeiron väestöstä. Tämä arvo on erittäin korkea, jos otetaan huomioon, että kaupungin väkiluku on noin 8 miljoonaa asukasta. Tämän arvon pienentämiseksi on tarpeen etsiä muita lokeja samalta yksilöltä. Kuvitelkaamme, että toinen analyysi, joka käytti D2S44-lokusta, paljasti alleelin, jonka taajuus oli 7,28%, prosenttiosuus, joka osoittaa 582 000 ihmisen olemassaolon Rio de Janeirossa tämän alleelin kanssa.
Mutta kuinka monella yksilöllä olisi molemmat alleelit? Vain 16,307. Tämä luku saadaan kertomalla näiden kahden taajuuden käänteisarvo: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 miljoonaa. Käyttämällä yhtä muuta lokusta analyysi osoittaa toisen taajuuden, jonka avulla voit vähentää prosenttiosuutta edelleen. Käytännössä viiden tai seitsemän koettimen käyttö tuottaa riittävän matalan arvon, jotta tulos olisi ratkaiseva.
