Men hvordan genkender man fragmenternes position? Til dette er det nødvendigt at bruge en “probe”, det vil sige et lille fragment af DNA mærket med en radioaktiv isotop eller med en radikal, der udsender lys under visse betingelser. Da det også er et DNA-fragment, indeholder sonden en sekvens, der kun supplerer en type af uforanderlig sekvens, der allerede er kendt til stede i fragmentet, der undersøges, hvilket tillader binding af begge.
Ved brug af fotografisk film opdages sondens position og derfor fragmentet. I tilfælde af enkelt-site-steder - som kun forekommer en gang i hele genomet - er der altid to "alleler", fordi celler (undtagen reproduktive) har et par af hvert kromosom. Da alleler har den samme basiske sekvens og forskellige størrelser, vil en probe, der er komplementær til denne sekvens, binde til begge, og de vises i forskellige positioner på den fotografiske film. Alle mennesker modtager en af disse alleler fra moderen og en fra faren.
Derfor er det i faderskabstesten nok at sammenligne moderens alleler, hendes barn (a) og den formodede far, og sammenfaldet mellem barnets faderallel og en allel af den formodede far vil bekræfte faderskabet ”Biologisk”. Når du kun vil undersøge identiteten på en person (f.eks. En kriminel), skal du sammenligne polymorfismønsteret fra DNA-prøver opnået på gerningsstedet med mønstrene for flere mistænkte.
Syntese af DNA-fragmenter
For at detektere polymorfismen anvendes primere, der flankerer områder af DNA'et, hvor der er nukleotid-gentagelser (i grupper på to, tre eller flere). Dette betyder, at sådanne primere afgrænser syntesen af de nye tråde til strækningen med gentagelserne, der er placeret mellem de steder, som de binder til. Sådanne gentagelser kaldes STR (Short Tandem Repeats eller "korte gentagelser i serie"), og de regioner, hvor de findes, er kendt som "mikrosatellitter".
mitokondrie-DNA
Ud over genomisk DNA, der er til stede i cellekernen, er der også DNA i mitokondrier, organeller placeret i cytoplasmaet. Dette DNA er meget mindre end nukleart og har en cirkulær struktur, som gør det mere ligesom for bakterier.
I forbindelse med retsmedicinsk analyse opstod interessen for mitokondrie-DNA af flere årsager: for det første indeholder dette DNA også polymorfe regioner, der tillader dets individualisering; for det andet modtager efterkommere kun dette DNA fra moderen, hvilket gør det muligt at spore en persons moderlinie; og for det tredje er dette DNA mere modstandsdygtigt over for nedbrydning end nukleart DNA. I større katastrofer (brande, eksplosioner, flyulykker osv.), Når det er sværere at identificere ligene, bliver mitokondrie-DNA analyseret. Dette ekstraheres fra resterne, og sekvensen af interesse sammenlignes med sekvenser opnået fra søskende eller moderens forfædre.
Grad af tillid til DNA-test
Et punkt, der har skabt intens diskussion blandt laboratorier og DNA-testbureauer, er antallet af polymorfe loci, der er nødvendige for pålideligt at etablere identitet og faderskab. Indekset, der bruges til konklusionerne, både på en persons identitet og på faderskab, afhænger af antallet af analyserede loci. For at nå frem til et passende indeks er det dog nødvendigt at tage højde for hyppigheden af alleler i befolkningen: hvis de er meget almindelige, vil resultaterne af analyserne i det mindste være tvivlsomme.
Blodgrupper (A, B, O og AB) kan bruges som et eksempel. Sådanne grupper, der er afhængige af kombinationen af alleler, er fordelt i befolkninger rundt om i verden med kendte frekvenser. I Tyskland har 46% til 48% type A-blod. I det centrale Eurasien, Indien, Mongoliet og Sibirien er type B fremherskende. I ingen af disse regioner kunne disse blodgrupper derfor bruges isoleret til at identificere et individ, fordi en stor procentdel af befolkningen ville have den ene eller den anden. Det er vigtigt, at de undersøgte alleler er sjældne.
I tilfælde af DNA-polymorfier (RFLP'er) er frekvenserne meget lavere. Lad os som et eksempel forestille os en faderskabskonflikt i Rio de Janeiro, hvor D10S28-locus bruges som en sonde, der giver den formodede far en allel, der forekommer i ca. 2,8% af befolkningen i Rio de Janeiro. Denne værdi er meget høj, hvis vi overvejer, at byens befolkning er omkring 8 millioner indbyggere. For at reducere denne værdi er det nødvendigt at søge efter andre steder i samme person. Lad os forestille os, at en anden analyse ved hjælp af D2S44-locus afslørede en allel med en frekvens på 7,28%, en procentdel, der indikerer eksistensen af 582.000 mennesker i Rio de Janeiro med denne allel.
Men hvor mange individer ville have begge alleler? Kun 16.307. Dette tal opnås ved at multiplicere det inverse af de to frekvenser: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 millioner. Ved at bruge et andet sted vil analysen indikere en anden frekvens, så du kan reducere procentdelen yderligere. I praksis genererer brug af fem til syv sonder en værdi, der er lav nok til, at resultatet er afgørende.
Kilde: Brasilien skole - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm
