Kako pa prepoznati položaj drobcev? Za to je treba uporabiti "sondo", to je majhen fragment DNK, označen z radioaktivnim izotopom ali z radikalom, ki oddaja svetlobo pod določenimi pogoji. Sonda, ki je tudi fragment DNA, vsebuje zaporedje, ki dopolnjuje samo eno vrsto nespremenljivega zaporedja, ki je že prisotno v preučevanem fragmentu, kar bo omogočilo vezavo obeh.
Z uporabo fotografskega filma se odkrije položaj sonde in zato drobca. V primeru lokacij na enem mestu - ki se v celotnem genomu pojavijo le enkrat - sta vedno dva "alela", ker imajo celice (razen reproduktivnih) po en par vsakega kromosoma. Ker imajo aleli enako osnovno zaporedje in različne velikosti, se sonda, ki je komplementarna temu zaporedju, veže na obe in se na fotografskem filmu prikažeta v različnih položajih. Vsi ljudje prejmejo enega od teh alelov od matere in enega od očeta.
Zato je v testu očetovstva dovolj primerjati alele matere, njenega otroka (a) in domnevnega očeta ter sovpadanje otrokovega očetovskega alela z alelom domnevnega očeta bo potrdilo očetovstvo “Biološki”. Ko želite raziskati samo identiteto osebe (denimo kriminalca), morate primerjajte vzorec polimorfizma vzorcev DNK, pridobljenih na kraju zločina, z vzorci več osumljenci.
Sinteza fragmentov DNA
Za odkrivanje polimorfizma se uporabljajo primerji, ki obkrožajo regije DNK, kjer so nukleotidne ponovitve (v skupinah po dva, tri ali več). To pomeni, da takšni osnovni premazi omejujejo sintezo novih pramenov na odsek s ponovitvami, ki se nahajajo med mesti, na katera se vežejo. Takšne ponovitve se imenujejo STR (kratke ponovitve v tandemu ali "kratke ponovitve v nizu"), regije, kjer jih najdemo, pa so znane kot "mikrosateliti".
mitohondrijska DNA
Poleg genomske DNA, ki je prisotna v jedru celic, obstaja tudi DNA v mitohondrijih, organelih, ki se nahajajo v citoplazmi. Ta DNA je veliko manjša od jedrske in ima krožno strukturo, zaradi česar je bolj podobna bakterijam.
V okviru forenzične analize se je zanimanje za mitohondrijsko DNA pojavilo iz več razlogov: prvič, ta DNA vsebuje tudi polimorfne regije, ki omogočajo njeno individualizacijo; drugič, potomci prejemajo to DNK samo od matere, kar omogoča sledenje materinega rodu osebe; in tretjič, ta DNA je bolj odporna na razgradnjo kot jedrska DNA. Tako se pri večjih nesrečah (požari, eksplozije, letalske nesreče itd.), Ko je telesa težje prepoznati, analizira mitohondrijska DNK. Ta se pridobi iz ostankov in zaporedje, ki nas zanima, primerja z zaporedji, pridobljenimi od bratov in sester ali materinskih prednikov.
Stopnja zaupanja v testiranje DNK
Ena točka, ki je sprožila intenzivno razpravo med laboratoriji in agencijami za testiranje DNK, je število polimorfnih lokusov, potrebnih za zanesljivo ugotavljanje identitete in očetovstva. Indeks, uporabljen za zaključke, tako glede identitete osebe kot očetovstva, je odvisen od števila analiziranih lokusov. Da bi prišli do ustreznega indeksa, pa je treba upoštevati pogostost alelov v populaciji: če so zelo pogosti, bodo rezultati analiz najmanj dvomljivi.
Kot primer lahko uporabimo krvne skupine (A, B, O in AB). Takšne skupine, ki so odvisne od kombinacije alelov, so porazdeljene v populacijah po vsem svetu z znanimi frekvencami. V Nemčiji ima 46% do 48% krvi vrste A. V srednji Evraziji, Indiji, Mongoliji in Sibiriji prevladuje tip B. Zato v nobeni od teh regij teh krvnih skupin ni mogoče uporabljati ločeno za identifikacijo posameznika, ker bi velik odstotek prebivalstva imel eno ali drugo. Pomembno je, da so preiskani aleli redki.
V primeru polimorfizmov DNA (RFLP) so frekvence precej nižje. Za primer si predstavljajmo spor o očetovstvu v Riu de Janeiru, kjer se uporablja lokus D10S28 kot sonda, ki pri domnevnem očetu omogoča pridobitev alela, ki se pojavlja pri približno 2,8% prebivalstva Ria de Janeira. Ta vrednost je zelo visoka, če upoštevamo, da ima prebivalstvo mesta okoli 8 milijonov prebivalcev. Da bi zmanjšali to vrednost, je treba iskati druge lokuse pri istem posamezniku. Predstavljajmo si, da je druga analiza z uporabo lokusa D2S44 razkrila alel s frekvenco 7,28%, odstotek, ki kaže na obstoj 582 000 ljudi v Riu de Janeiru s tem alelom.
Toda koliko posameznikov bi imelo oba alela? Le 16.307. To število dobimo z množenjem inverzne vrednosti dveh frekvenc: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 milijonov. Z uporabo še enega lokusa bo analiza pokazala drugo frekvenco, kar vam bo omogočilo nadaljnje zmanjšanje odstotka. V praksi uporaba petih do sedmih sond ustvari vrednost, ki je dovolj nizka, da je rezultat prepričljiv.
Vir: Brazilska šola - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm