Ali kako prepoznati položaj ulomaka? Za to je potrebno upotrijebiti "sondu", odnosno mali fragment DNA obilježen radioaktivnim izotopom ili radikalom koji u određenim uvjetima emitira svjetlost. Budući da je ujedno i DNA fragment, sonda sadrži sekvencu koja nadopunjuje samo jednu vrstu invarijantne sekvence koja je već prisutna u ispitivanom fragmentu, što će omogućiti vezanje oba.
Korištenjem fotografskog filma otkriva se položaj sonde i, prema tome, fragmenta. U slučaju mjesta s jednim mjestom - koja se javljaju samo jednom u cijelom genomu - uvijek postoje dva "alela", jer stanice (osim reproduktivnih) imaju par svakog kromosoma. Kako aleli imaju isti osnovni slijed i različite veličine, sonda komplementarna tom nizu vezat će se za oboje i pojavljivat će se na različitim položajima na fotografskom filmu. Svi ljudi dobivaju jedan od ovih alela od majke, a jedan od oca.
Stoga je u testu očinstva dovoljno usporediti alele majke, njenog djeteta (a) i navodnog oca, i podudarnost djetetovog alela s ocem s alelom navodnog oca potvrdit će očinstvo "biološki". Kada želite istražiti samo identitet osobe (na primjer kriminalca), morate usporedite uzorak polimorfizma uzoraka DNA dobivenih na mjestu zločina s uzorcima nekoliko njih osumnjičenih.
Sinteza fragmenata DNA
Da bi se otkrio polimorfizam, koriste se početnici koji bokuju područja DNA gdje postoje nukleotidni repeti (u skupinama od dvije, tri ili više). To znači da takvi početnici ograničavaju sintezu novih niti na istezanje s ponavljanjima, smještenim između mjesta na koja se vežu. Takva se ponavljanja nazivaju STR (kratka tandemska ponavljanja ili "kratka ponavljanja u nizu"), a regije u kojima se nalaze poznate su kao "mikrosateliti".
mitohondrijska DNA
Pored genomske DNA, prisutne u jezgri stanica, postoji i DNA u mitohondrijima, organelama smještenim u citoplazmi. Ta je DNA mnogo manja od nuklearne i ima kružnu strukturu, što je čini sličnijom bakterijama.
U kontekstu forenzičke analize, interes za mitohondrijsku DNA nastao je iz nekoliko razloga: prvo, ova DNA također sadrži polimorfne regije koje omogućuju njezinu individualizaciju; drugo, potomci dobivaju ovu DNK samo od majke, što omogućava praćenje majčine loze osobe; i treće, ta je DNA otpornija na razgradnju od nuklearne DNA. Dakle, u velikim katastrofama (požari, eksplozije, zrakoplovne nesreće itd.), Kada je teže identificirati tijela, analizira se mitohondrijska DNA. To se izdvaja iz ostataka i slijed od interesa uspoređuje se sa nizovima dobivenim od braće i sestara ili predaka po majci.
Stupanj pouzdanosti ispitivanja DNA
Jedna točka koja je pokrenula intenzivnu raspravu među laboratorijima i agencijama za ispitivanje DNA jest broj polimorfnih lokusa potrebnih za pouzdanu utvrdu identiteta i očinstva. Indeks koji se koristi za zaključke, kako o identitetu osobe tako i o očinstvu, ovisi o broju analiziranih lokusa. Međutim, da bi se došlo do odgovarajućeg indeksa, potrebno je uzeti u obzir učestalost alela u populaciji: ako su vrlo česti, rezultati analiza bit će u najmanju ruku sumnjivi.
Kao primjer mogu se koristiti krvne grupe (A, B, O i AB). Takve skupine, koje ovise o kombinaciji alela, raspodijeljene su u populacijama širom svijeta s poznatim frekvencijama. U Njemačkoj 46% do 48% ima krv tipa A. U srednjoj Euroaziji, Indiji, Mongoliji i Sibiru prevladava tip B. Stoga se ni u jednoj od ovih regija te krvne grupe ne bi mogle koristiti izolirano za identificiranje pojedinca, jer bi velik postotak stanovništva imao jedno ili drugo. Važno je da su istraženi aleli rijetki.
U slučaju DNA polimorfizama (RFLP), frekvencije su mnogo niže. Kao primjer, zamislimo spor oko očinstva u Rio de Janeiru gdje se koristi lokus D10S28 kao sonda koja omogućava navodnom ocu dobivanje alela koji se javlja u otprilike 2,8% stanovništva Rio de Janeira. Ova je vrijednost vrlo visoka ako uzmemo u obzir da gradsko stanovništvo broji oko 8 milijuna stanovnika. Da biste smanjili ovu vrijednost, potrebno je potražiti druge lokuse kod iste osobe. Zamislimo da je druga analiza, koristeći lokus D2S44, otkrila alel s frekvencijom od 7,28%, postotak koji ukazuje na postojanje 582 000 ljudi u Rio de Janeiru s tim alelom.
Ali koliko bi pojedinaca imalo oba alela? Samo 16.307. Ovaj se broj dobiva množenjem inverzne dvije frekvencije: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 milijuna. Koristeći još jedan lokus, analiza će naznačiti drugu učestalost, što vam omogućuje daljnje smanjenje postotka. U praksi se upotrebom pet do sedam sondi generira vrijednost dovoljno niska da rezultat bude konačan.
Izvor: Brazil škola - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm
