Kuidas aga killude asukohta ära tunda? Selleks on vaja kasutada “sondi”, see tähendab väikest DNA fragmenti, mis on märgistatud radioaktiivse isotoobi või teatud tingimustes valgust kiirgava radikaaliga. Olles ka DNA fragment, sisaldab sond järjestust, mis täiendab ainult ühte tüüpi invariantset järjestust, mis on uuritavas fragmendis juba teada ja mis võimaldab mõlemat seonduda.
Fotofilmi kasutamisel avastatakse sondi ja seega ka fragmendi asend. Ühekohaliste saitide korral - mis esinevad kogu genoomis ainult ühe korra - on alati kaks „alleeli”, kuna rakkudel (välja arvatud reproduktiivsed) on kromosoomidest üks paar. Kuna alleelidel on sama põhijärjestus ja erinevad suurused, seondub sellele järjestusele täiendav sond mõlemaga ja need ilmuvad fotofilmis erinevates asendites. Kõik inimesed saavad ühe neist alleelidest emalt ja ühe isalt.
Seetõttu piisab isadustestis ema, tema poja (a) ja oletatava isa alleelide võrdlemisest ning lapse isaliku alleeli kokkulangevus oletatava isa alleeliga kinnitab isadust “Bioloogiline”. Kui soovite uurida ainult isiku (näiteks kurjategija) isikut, peate seda tegema võrrelge kuriteopaigal saadud DNA proovide polümorfismimustrit mitme mustriga kahtlusalused.
DNA fragmentide süntees
Polümorfismi tuvastamiseks kasutatakse praimereid, mis külgnevad DNA piirkondades, kus on nukleotiidide kordused (kahe, kolme või enama rühmana). See tähendab, et sellised praimerid piiritlevad uute ahelate sünteesi kordustega, mis paiknevad nende sidumiskohtade vahel. Selliseid kordusi nimetatakse STR-ideks (lühikesed tandemkordused või „lühikesed kordused järjestikku“) ja piirkondi, kus neid leidub, nimetatakse „mikrosatelliitideks“.
mitokondriaalne DNA
Lisaks raku tuumas esinevale genoomsele DNA-le on DNA ka mitokondrites, tsütoplasmas paiknevates organellides. See DNA on palju väiksem kui tuuma ja sellel on ümmargune struktuur, mis muudab selle sarnasemaks bakterite omaga.
Kohtuekspertiisi analüüsi kontekstis tekkis huvi mitokondriaalse DNA vastu mitmel põhjusel: esiteks sisaldab see DNA ka polümorfseid piirkondi, mis võimaldavad selle individualiseerimist; teiseks saavad järeltulijad selle DNA ainult emalt, mis võimaldab jälgida inimese emapoolset suguvõsa; ja kolmandaks on see DNA lagunemisele vastupidavam kui tuuma-DNA. Seega suuremate katastroofide korral (tulekahjud, plahvatused, lennuõnnetused jne), kui laipade tuvastamine on keerulisem, analüüsitakse mitokondrite DNA-d. See eraldatakse jäänustest ja huvipakkuvat järjestust võrreldakse järjestustega, mis saadi õdelt-vennalt või ema esivanematelt.
DNA-testimise usalduse aste
Üks punkt, mis on tekitanud laborites ja DNA testimisasutustes intensiivset arutelu, on identiteedi ja isaduse usaldusväärseks tuvastamiseks vajalik polümorfsete lookuste arv. Nii isiku identiteedi kui ka isaduse kohta järelduste tegemiseks kasutatud indeks sõltub analüüsitud lookuste arvust. Piisava indeksini jõudmiseks on siiski vaja arvestada alleelide esinemissagedusega populatsioonis: kui need on väga levinud, on analüüside tulemused vähemalt kaheldavad.
Näitena võib kasutada veregruppe (A, B, O ja AB). Sellised alleelide kombinatsioonist sõltuvad rühmad jaotuvad teadaolevate sagedustega populatsioonides kogu maailmas. Saksamaal on A-tüüpi verd 46–48% -l. Kesk-Euraasias, Indias, Mongoolias ja Siberis valitseb tüüp B. Seetõttu ei saa üheski neist piirkondadest neid veregruppe üksikisiku tuvastamiseks eraldi kasutada, sest suurel osal elanikkonnast oleks üks või teine. On oluline, et uuritud alleele oleks harva.
DNA polümorfismide (RFLP) korral on sagedused palju madalamad. Kujutagem näiteks isadustüli Rio de Janeiros, kus kasutatakse lookust D10S28 sondina, mis võimaldab oletataval isal saada alleeli, mis esineb umbes 2,8% -l Rio de Janeiro elanikkonnast. See väärtus on väga kõrge, kui arvestada, et linnas elab umbes 8 miljonit elanikku. Selle väärtuse vähendamiseks on vaja samal isendil otsida teisi lookusi. Kujutagem ette, et teine analüüs, kasutades lookust D2S44, näitas alleeli, mille sagedus oli 7,28%, protsent, mis näitab selle alleeliga Rio de Janeiros 582 000 inimese olemasolu.
Kuid kui paljudel isenditel oleks mõlemad alleelid? Ainult 16,307. See arv saadakse kahe sageduse pöördvõimaluse korrutamisel: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 miljonit. Kasutades veel ühte vedurit, näitab analüüs teist sagedust, mis võimaldab teil protsenti veelgi vähendada. Praktikas tekitab viie kuni seitsme sondi kasutamine väärtuse, mis on piisavalt madal, et tulemus oleks lõplik.
Allikas: Brasiilia kool - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm
