Αλλά πώς να αναγνωρίσετε τη θέση των θραυσμάτων; Για αυτό, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιήσετε έναν «ανιχνευτή», δηλαδή ένα μικρό κομμάτι DNA που έχει επισημανθεί με ραδιενεργό ισότοπο ή με μια ρίζα που εκπέμπει φως υπό ορισμένες συνθήκες. Όντας επίσης ένα θραύσμα DNA, ο ανιχνευτής περιέχει μια αλληλουχία που συμπληρώνει μόνο έναν τύπο αναλλοίωτης αλληλουχίας που είναι ήδη γνωστή παρούσα στο θραύσμα που μελετάται, η οποία θα επιτρέψει τη σύνδεση και των δύο.
Με τη χρήση φωτογραφικού φιλμ, ανακαλύπτεται η θέση του ανιχνευτή και, συνεπώς, του θραύσματος. Στην περίπτωση τοποθεσιών μίας τοποθεσίας - που εμφανίζονται μόνο μία φορά σε ολόκληρο το γονιδίωμα - υπάρχουν πάντα δύο "αλληλόμορφα", επειδή τα κύτταρα (εκτός από τα αναπαραγωγικά) έχουν ένα ζεύγος κάθε χρωμοσώματος. Καθώς τα αλληλόμορφα έχουν την ίδια βασική ακολουθία και διαφορετικά μεγέθη, ένας ανιχνευτής συμπληρωματικός αυτής της ακολουθίας θα συνδεθεί και στα δύο και θα εμφανιστούν σε διαφορετικές θέσεις στο φωτογραφικό φιλμ. Όλοι οι άνθρωποι λαμβάνουν ένα από αυτά τα αλληλόμορφα από τη μητέρα και ένα από τον πατέρα.
Επομένως, στο τεστ πατρότητας, αρκεί να συγκρίνουμε τα αλληλόμορφα της μητέρας, του γιου της (α) και του υποτιθέμενου πατέρα, και Η σύμπτωση του πατρικού αλληλίου του παιδιού με το αλληλόμορφο του υποτιθέμενου πατέρα θα επιβεβαιώσει την πατρότητα "βιολογικός". Όταν θέλετε μόνο να διερευνήσετε την ταυτότητα ενός ατόμου (για παράδειγμα ένας εγκληματίας), πρέπει να το κάνετε Συγκρίνετε το μοτίβο πολυμορφισμού των δειγμάτων DNA που αποκτήθηκαν στη σκηνή του εγκλήματος με τα πρότυπα πολλών ύποπτοι.
Σύνθεση θραυσμάτων DNA
Για την ανίχνευση του πολυμορφισμού, χρησιμοποιούνται εναρκτήρες που πλαισιώνουν περιοχές του DNA όπου υπάρχουν επαναλήψεις νουκλεοτιδίων (σε ομάδες δύο, τριών ή περισσότερων). Αυτό σημαίνει ότι τέτοιοι εκκινητές οριοθετούν τη σύνθεση νέων κλώνων στο τέντωμα με τις επαναλήψεις, που βρίσκονται μεταξύ των θέσεων στις οποίες συνδέονται. Τέτοιες επαναλήψεις ονομάζονται STR (Short Tandem Repeats, ή "σύντομες επαναλήψεις σε σειρά"), και οι περιοχές όπου βρίσκονται είναι γνωστές ως "microsatellites".
μιτοχονδριακό DNA
Εκτός από το γονιδιωματικό DNA, που υπάρχει στον πυρήνα των κυττάρων, υπάρχει επίσης DNA στα μιτοχόνδρια, οργανίδια που βρίσκονται στο κυτόπλασμα. Αυτό το DNA είναι πολύ μικρότερο από το πυρηνικό και έχει κυκλική δομή, η οποία το κάνει περισσότερο σαν βακτήρια.
Στο πλαίσιο της ιατροδικαστικής ανάλυσης, το ενδιαφέρον για το μιτοχονδριακό DNA προέκυψε για διάφορους λόγους: πρώτον, αυτό το DNA περιέχει επίσης πολυμορφικές περιοχές που επιτρέπουν την εξατομίκευσή του. Δεύτερον, οι απόγονοι λαμβάνουν αυτό το DNA μόνο από τη μητέρα, γεγονός που καθιστά δυνατή την ανίχνευση της μητρικής καταγωγής ενός ατόμου. και τρίτον, αυτό το DNA είναι πιο ανθεκτικό στην αποδόμηση από το πυρηνικό DNA. Έτσι, σε μεγάλες καταστροφές (πυρκαγιές, εκρήξεις, αεροπορικές συγκρούσεις κ.λπ.), όταν είναι πιο δύσκολο να εντοπιστούν τα σώματα, το μιτοχονδριακό DNA αναλύεται. Αυτό εξάγεται από τα υπολείμματα και η ακολουθία ενδιαφέροντος συγκρίνεται με αλληλουχίες που λαμβάνονται από αδέλφια ή μητρικούς προγόνους.
Βαθμός εμπιστοσύνης του DNA
Ένα σημείο που έχει προκαλέσει έντονη συζήτηση μεταξύ εργαστηρίων και οργανισμών δοκιμών DNA είναι ο αριθμός των πολυμορφικών τόπων που απαιτούνται για την αξιόπιστη δημιουργία ταυτότητας και πατρότητας. Ο δείκτης που χρησιμοποιείται για συμπεράσματα, τόσο για την ταυτότητα ενός ατόμου όσο και για την πατρότητα, εξαρτάται από τον αριθμό των τοποθεσιών που αναλύθηκαν. Ωστόσο, για να φτάσουμε σε έναν κατάλληλο δείκτη, είναι απαραίτητο να ληφθεί υπόψη η συχνότητα των αλληλίων στον πληθυσμό: εάν είναι πολύ συχνές, τα αποτελέσματα των αναλύσεων θα είναι, τουλάχιστον, αμφίβολα.
Οι ομάδες αίματος (A, B, O και AB) μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως παράδειγμα. Τέτοιες ομάδες, οι οποίες εξαρτώνται από τον συνδυασμό αλληλίων, κατανέμονται σε πληθυσμούς σε όλο τον κόσμο με γνωστές συχνότητες. Στη Γερμανία, 46% έως 48% έχουν αίμα τύπου Α. Στην Κεντρική Ευρασία, την Ινδία, τη Μογγολία και τη Σιβηρία, υπερισχύει ο τύπος Β. Σε καμία από αυτές τις περιοχές, επομένως, δεν θα μπορούσαν αυτές οι ομάδες αίματος να χρησιμοποιηθούν μεμονωμένα για τον προσδιορισμό ενός ατόμου, επειδή ένα μεγάλο ποσοστό του πληθυσμού θα είχε το ένα ή το άλλο. Είναι σημαντικό ότι τα αλληλόμορφα που εξετάστηκαν είναι σπάνια.
Στην περίπτωση πολυμορφισμών DNA (RFLPs), οι συχνότητες είναι πολύ χαμηλότερες. Για παράδειγμα, ας φανταστούμε μια διαμάχη πατρότητας στο Ρίο ντε Τζανέιρο όπου χρησιμοποιείται ο τόπος D10S28 ως ανιχνευτής, επιτρέποντας να αποκτήσει, στον υποτιθέμενο πατέρα, ένα αλληλόμορφο που εμφανίζεται σε περίπου 2,8% του πληθυσμού του Ρίο ντε Τζανέιρο. Αυτή η τιμή είναι πολύ υψηλή αν θεωρήσουμε ότι ο πληθυσμός της πόλης είναι περίπου 8 εκατομμύρια κάτοικοι. Για να μειώσετε αυτήν την τιμή, είναι απαραίτητο να αναζητήσετε άλλες τοποθεσίες στο ίδιο άτομο. Ας φανταστούμε ότι μια δεύτερη ανάλυση, χρησιμοποιώντας τον τόπο D2S44, αποκάλυψε ένα αλληλόμορφο με συχνότητα 7,28%, ποσοστό που δείχνει την ύπαρξη 582.000 ανθρώπων στο Ρίο ντε Τζανέιρο με αυτό το αλληλόμορφο.
Αλλά πόσα άτομα θα έχουν και τα δύο αλληλόμορφα; Μόνο 16,307. Αυτός ο αριθμός λαμβάνεται πολλαπλασιάζοντας το αντίστροφο των δύο συχνοτήτων: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 εκατομμύρια. Χρησιμοποιώντας έναν ακόμη τόπο, η ανάλυση θα δείξει μια άλλη συχνότητα, επιτρέποντάς σας να μειώσετε περαιτέρω το ποσοστό. Στην πράξη, η χρήση πέντε έως επτά ανιχνευτών δημιουργεί μια τιμή αρκετά χαμηλή ώστε το αποτέλεσμα να είναι πειστικό.
Πηγή: Σχολείο της Βραζιλίας - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm