Men hur känner man igen fragmentens position? För detta är det nödvändigt att använda en "sond", det vill säga ett litet fragment av DNA märkt med en radioaktiv isotop eller med en radikal som avger ljus under vissa förhållanden. Eftersom det också är ett DNA-fragment, innehåller sonden en sekvens som endast kompletterar en typ av invariant sekvens som redan är känd närvarande i fragmentet som studeras, vilket möjliggör bindning av båda.
Med användning av fotografisk film upptäcks placeringen av sonden och därför av fragmentet. När det gäller webbplatser med en enda plats - som bara förekommer en gång i hela genomet - finns det alltid två ”alleler”, eftersom celler (utom reproduktiva) har ett par av varje kromosom. Eftersom allelerna har samma grundsekvens och olika storlekar, kommer en sond som kompletterar den sekvensen att binda till båda och de kommer att visas i olika positioner på den fotografiska filmen. Alla människor får en av dessa alleler från modern och en från fadern.
Därför är det i faderskapstestet tillräckligt att jämföra moderns alleler, hennes barn (a) och den förmodade fadern, och sammanfallet mellan barnets faderallel och en allel av den förmodade fadern kommer att bekräfta faderskap "biologisk". När du bara vill utreda en persons identitet (till exempel en brottsling) måste du göra det jämföra polymorfismönster för DNA-prover som erhållits på brottsplatsen med mönster för flera misstänkta.
Syntes av DNA-fragment
För att detektera polymorfismen används primrar som flankerar regioner i DNA där det finns nukleotidupprepningar (i grupper om två, tre eller fler). Detta innebär att sådana primers avgränsar syntesen av de nya strängarna till sträckan med repetitionerna, belägna mellan de platser som de binder till. Sådana repetitioner kallas STR (Short Tandem Repeats, eller "korta repetitioner i serie"), och de regioner där de finns är kända som "mikrosatelliter".
mitokondriellt DNA
Förutom genomiskt DNA, som finns i cellkärnan, finns det också DNA i mitokondrier, organeller som finns i cytoplasman. Detta DNA är mycket mindre än kärnkraft och har en cirkulär struktur, vilket gör det mer som för bakterier.
Inom ramen för kriminalteknisk analys uppstod intresse för mitokondriellt DNA av flera skäl: för det första innehåller detta DNA också polymorfa regioner som möjliggör dess individualisering; för det andra får ättlingar detta DNA endast från modern, vilket gör det möjligt att spåra en persons moderlinje; och för det tredje är detta DNA mer motståndskraftigt mot nedbrytning än nukleärt DNA. Således, vid större katastrofer (bränder, explosioner, flygkrascher, etc.), när det är svårare att identifiera kropparna, analyseras mitokondriellt DNA. Detta extraheras från resterna och sekvensen av intresse jämförs med sekvenser erhållna från syskon eller moderförfäder.
Graden av förtroende för DNA-testning
En punkt som har genererat intensiv diskussion bland laboratorier och DNA-testbyråer är antalet polymorfa loci som behövs för att pålitligt fastställa identitet och faderskap. Det index som används för slutsatserna, både på en persons identitet och på faderskap, beror på antalet analyserade loci. För att komma fram till ett adekvat index är det dock nödvändigt att ta hänsyn till frekvensen av allelerna i befolkningen: om de är mycket vanliga blir resultaten av analyserna åtminstone tveksamma.
Blodgrupper (A, B, O och AB) kan användas som exempel. Sådana grupper, som är beroende av kombinationen av alleler, är fördelade i befolkningar runt om i världen med kända frekvenser. I Tyskland har 46% till 48% typ A-blod. I centrala Eurasien, Indien, Mongoliet och Sibirien råder typ B. I ingen av dessa regioner kunde dessa blodgrupper därför användas isolerat för att identifiera en individ, eftersom en stor andel av befolkningen skulle ha den ena eller den andra. Det är viktigt att de undersökta allelerna är sällsynta.
När det gäller DNA-polymorfismer (RFLP) är frekvenserna mycket lägre. Som ett exempel, låt oss föreställa oss en faderskapstvist i Rio de Janeiro där D10S28-locus används som en sond, vilket gör det möjligt för den förmodade fadern att få en allel som förekommer i cirka 2,8% av befolkningen i Rio de Janeiro. Detta värde är mycket högt om vi anser att stadens befolkning är cirka 8 miljoner invånare. För att minska detta värde är det nödvändigt att söka efter andra platser i samma person. Låt oss föreställa oss att en andra analys, med användning av D2S44-locus, avslöjade en allel med en frekvens på 7,28%, en procentsats som indikerar förekomsten av 582 000 personer i Rio de Janeiro med denna allel.
Men hur många individer skulle ha båda allelerna? Endast 16.307. Detta tal erhålls genom att multiplicera det inversa av de två frekvenserna: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 miljoner. Genom att använda ytterligare ett locus kommer analysen att indikera en annan frekvens, så att du kan minska procentsatsen ytterligare. I praktiken genererar användning av fem till sju sonder ett värde som är tillräckligt lågt för att resultatet ska bli avgörande.
Källa: Brazil School - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm
