Но как распознать положение фрагментов? Для этого необходимо использовать «зонд», то есть небольшой фрагмент ДНК, меченный радиоактивным изотопом или радикалом, излучающим свет при определенных условиях. Являясь также фрагментом ДНК, зонд содержит последовательность, которая дополняет только один тип инвариантной последовательности, уже известной, присутствующей в исследуемом фрагменте, что позволяет связываться с обоими.
С помощью фотопленки определяется положение зонда и, следовательно, фрагмента. В случае сайтов с одним сайтом - которые встречаются только один раз во всем геноме - всегда есть два «аллеля», потому что клетки (кроме репродуктивных) имеют по одной паре каждой хромосомы. Поскольку аллели имеют одинаковую базовую последовательность и разные размеры, зонд, комплементарный этой последовательности, будет связываться с обоими, и они будут появляться в разных положениях на фотопленке. Все люди получают один из этих аллелей от матери и один от отца.
Следовательно, в тесте на отцовство достаточно сравнить аллели матери, ее ребенка (а) и предполагаемого отца, и совпадение отцовского аллеля ребенка с аллелем предполагаемого отца подтвердит отцовство «Биологический». Если вы хотите только установить личность человека (например, преступника), вы должны сравнить образец полиморфизма образцов ДНК, полученных на месте преступления, с образцами нескольких подозреваемые.
Синтез фрагментов ДНК
Для обнаружения полиморфизма используются праймеры, фланкирующие участки ДНК, где есть нуклеотидные повторы (группами по два, три или более). Это означает, что такие праймеры ограничивают синтез новых цепей до участка с повторами, расположенными между сайтами, с которыми они связываются. Такие повторы называются STR (короткие тандемные повторы или «короткие последовательные повторы»), а области, в которых они встречаются, называются «микросателлитами».
митохондриальная ДНК
Помимо геномной ДНК, присутствующей в ядре клеток, есть еще ДНК в митохондриях, органеллах, расположенных в цитоплазме. Эта ДНК намного меньше ядерной и имеет круговую структуру, которая больше похожа на структуру бактерий.
В контексте судебно-медицинской экспертизы интерес к митохондриальной ДНК возник по нескольким причинам: во-первых, эта ДНК также содержит полиморфные области, которые позволяют ее индивидуализировать; во-вторых, потомки получают эту ДНК только от матери, что позволяет проследить материнское происхождение человека; и в-третьих, эта ДНК более устойчива к деградации, чем ядерная ДНК. Таким образом, при крупных катастрофах (пожары, взрывы, авиакатастрофы и т. Д.), Когда тела труднее идентифицировать, анализируется митохондриальная ДНК. Его извлекают из останков, и интересующую последовательность сравнивают с последовательностями, полученными от братьев и сестер или от предков по материнской линии.
Степень достоверности ДНК-тестирования
Один момент, который вызвал интенсивную дискуссию среди лабораторий и агентств по тестированию ДНК, - это количество полиморфных локусов, необходимых для надежного установления личности и отцовства. Индекс, используемый для выводов, как о личности человека, так и об отцовстве, зависит от количества проанализированных локусов. Однако для получения адекватного показателя необходимо учитывать частоту аллелей в популяции: если они очень распространены, результаты анализов будут, мягко говоря, сомнительными.
В качестве примера можно использовать группы крови (A, B, O и AB). Такие группы, зависящие от комбинации аллелей, распределены в популяциях по всему миру с известной частотой. В Германии от 46% до 48% имеют кровь типа А. В Центральной Евразии, Индии, Монголии и Сибири преобладает тип B. Следовательно, ни в одном из этих регионов нельзя использовать эти группы крови изолированно для идентификации человека, потому что большой процент населения будет иметь тот или иной. Важно, чтобы исследуемые аллели были редкими.
В случае полиморфизмов ДНК (ПДРФ) частоты намного ниже. В качестве примера представим спор об отцовстве в Рио-де-Жанейро, где используется локус D10S28. в качестве зонда, позволяющего получить у предполагаемого отца аллель, который встречается примерно у 2,8% населения Рио-де-Жанейро. Эта величина очень высока, если учесть, что население города составляет около 8 миллионов жителей. Чтобы уменьшить это значение, необходимо искать другие локусы у того же человека. Давайте представим, что второй анализ с использованием локуса D2S44 выявил аллель с частотой 7,28%, процент, который указывает на существование 582 000 человек в Рио-де-Жанейро с этим аллелем.
Но у скольких людей будут оба аллеля? Всего 16 307 человек. Это число получается путем умножения обратной величины двух частот: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 миллионов. Используя еще один локомотив, анализ укажет другую частоту, что позволит вам еще больше снизить процент. На практике использование пяти-семи датчиков дает достаточно низкое значение, чтобы результат был окончательным.
Источник: Бразильская школа - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm