Bet kaip atpažinti fragmentų padėtį? Tam būtina naudoti „zondą“, tai yra nedidelį DNR fragmentą, pažymėtą radioaktyviu izotopu arba radikalu, kuris tam tikromis sąlygomis skleidžia šviesą. Zondas taip pat yra DNR fragmentas, jame yra seka, papildanti tik vieną invariantinės sekos tipą, kuris jau yra žinomas tiriamame fragmente, kuris leis susieti abu.
Naudojant fotojuostą, atrandama zondo ir, taigi, fragmento padėtis. Vienoje vietoje esančių vietų atveju - kurios visame genome pasitaiko tik vieną kartą - visada yra du „aleliai“, nes ląstelės (išskyrus reprodukcines) turi po vieną kiekvienos chromosomos porą. Kadangi aleliai turi tą pačią pagrindinę seką ir skirtingus dydžius, tą seką papildantis zondas prisijungs prie abiejų ir jie pasirodys skirtingose fotografijos juostos vietose. Visi žmonės vieną iš šių alelių gauna iš motinos ir vieną iš tėvo.
Todėl atliekant tėvystės testą pakanka palyginti motinos, jos vaiko (a) ir tariamo tėvo alelius, ir vaiko tėvo alelio sutapimas su tariamo tėvo aleliu patvirtins tėvystę „Biologinis“. Kai norite ištirti tik asmens (pavyzdžiui, nusikaltėlio) tapatybę, turite tai padaryti palyginkite nusikaltimo vietoje gautų DNR mėginių polimorfizmo modelį su kelių modeliais įtariamieji.
DNR fragmentų sintezė
Norint nustatyti polimorfizmą, naudojami pradmenys, kurie riboja DNR sritis, kur yra nukleotidų pasikartojimų (grupėse po du, tris ar daugiau). Tai reiškia, kad tokie pradmenys nustato naujų sruogų sintezę ruože su pakartojimais, esančiais tarp vietų, prie kurių jie prisijungia. Tokie pasikartojimai vadinami STR („Short Tandem Repeats“ arba „trumpi pakartojimai iš eilės“), o regionai, kuriuose jie yra, vadinami „mikrosatelitais“.
mitochondrijų DNR
Be genominės DNR, esančios ląstelių branduolyje, DNR yra ir mitochondrijose - organopeliuose, esančiuose citoplazmoje. Ši DNR yra daug mažesnė nei branduolinė ir turi apvalią struktūrą, todėl ji labiau panaši į bakterijas.
Teismo ekspertizės kontekste susidomėjimas mitochondrijų DNR kilo dėl kelių priežasčių: pirma, šioje DNR taip pat yra polimorfinių sričių, leidžiančių ją individualizuoti; antra, palikuonys šią DNR gauna tik iš motinos, o tai leidžia atsekti žmogaus motinos giminę; trečia, ši DNR yra atsparesnė skaidymui nei branduolinė DNR. Taigi didelių nelaimių metu (gaisrai, sprogimai, lėktuvo katastrofos ir kt.), Kai kūnus identifikuoti sunkiau, analizuojama mitochondrijų DNR. Tai išgaunama iš palaikų ir dominanti seka palyginama su sekomis, gautomis iš brolių ar seserų protėvių.
Nesustokite dabar... Po reklamos dar daugiau;)
DNR tyrimų pasitikėjimo laipsnis
Vienas taškas, sukėlęs intensyvias diskusijas tarp laboratorijų ir DNR tyrimų agentūrų, yra polimorfinių lokusų, reikalingų patikimai nustatyti tapatybę ir tėvystę, skaičius. Išvadoms naudojamas indeksas tiek dėl asmens tapatybės, tiek dėl tėvystės priklauso nuo analizuojamų lokusų skaičiaus. Tačiau norint pasiekti tinkamą indeksą, būtina atsižvelgti į alelių dažnį populiacijoje: jei jie yra labai dažni, analizių rezultatai bus, švelniai tariant, abejotini.
Kaip pavyzdį galima naudoti kraujo grupes (A, B, O ir AB). Tokios grupės, kurios priklauso nuo alelių derinio, pasiskirsto populiacijose visame pasaulyje su žinomais dažniais. Vokietijoje A tipo kraują turi 46–48 proc. Centrinėje Eurazijoje, Indijoje, Mongolijoje ir Sibire vyrauja B tipas. Todėl nė viename iš šių regionų šios kraujo grupės negalėjo būti naudojamos atskirai, norint identifikuoti asmenį, nes didelis procentas gyventojų turėtų vieną ar kitą. Svarbu, kad tiriami aleliai būtų reti.
DNR polimorfizmų (RFLP) atveju dažniai yra daug mažesni. Pavyzdžiui, įsivaizduokime tėvystės ginčą Rio de Žaneire, kur naudojamas D10S28 lokusas kaip zondą, leidžiantį tariamam tėvui gauti alelį, kuris atsiranda maždaug 2,8% Rio de Žaneiro gyventojų. Ši vertė yra labai didelė, jei manome, kad mieste gyvena apie 8 milijonai gyventojų. Norint sumažinti šią vertę, būtina ieškoti kitų to paties asmens lokusų. Įsivaizduokime, kad antroji analizė, naudojant D2S44 lokusą, atskleidė aliejų, kurio dažnis buvo 7,28% - tai procentas, rodantis, kad Rio de Žaneire su šiuo aleliu egzistuoja 582 000 žmonių.
Bet kiek individų turėtų abu alelius? Tik 16,307. Šis skaičius gaunamas padauginus atvirkštinius du dažnius: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 milijonus. Naudojant dar vieną lokomotyvą, analizė nurodys kitą dažnį, leidžiantį dar labiau sumažinti procentą. Praktiškai naudojant nuo penkių iki septynių zondų, gaunama pakankamai maža vertė, kad rezultatas būtų įtikinamas.
