סינתזה של שברי DNA

אך כיצד לזהות את מיקום השברים? לשם כך, יש צורך להשתמש ב"חללית ", כלומר, קטע קטן של DNA המסומן עם איזוטופ רדיואקטיבי או עם רדיקל הפולט אור בתנאים מסוימים. בהיותו גם שבר DNA, המבחן מכיל רצף המשלים רק סוג אחד של רצף בלתי-משתנה שכבר ידוע הקיים בקטע הנחקר, שיאפשר קישור של שניהם.

עם שימוש בסרט צילומי מתגלה מיקום החללית ולכן של השבר. במקרה של אתרים בודדים - המתרחשים רק פעם אחת בכל הגנום - ישנם תמיד שני "אללים", מכיוון שלתאים (למעט אלה של רבייה) יש זוג אחד מכל כרומוזום. מכיוון שלאללים יש אותו רצף בסיסי וגדלים שונים, בדיקה המשלימה לרצף זה תיקשר לשניהם והם יופיעו במיקומים שונים בסרט הצילום. כל האנשים מקבלים אחד מהאללים הללו מהאם ואחד מהאב.

לכן, במבחן האבהות, מספיק להשוות בין אללי האם, ילדה (א) והאב כביכול, ו צירוף המקרים של האלל האבהי של הילד עם אלל של האב כביכול יאשר את האבהות "בִּיוֹלוֹגִי". כשאתה רוצה לחקור רק את זהותו של אדם (עבריין, למשל), אתה צריך להשוות את דפוס הפולימורפיזם של דגימות DNA שהושגו בזירת הפשע לדפוסים של כמה חשודים.

סינתזה של שברי DNA

כדי לאתר את הפולימורפיזם, משתמשים בפריימרים שמאגפים אזורים ב- DNA שבהם יש חזרות על נוקלאוטידים (בקבוצות של שניים, שלושה או יותר). משמעות הדבר היא כי פריימרים כאלה תוחמים את הסינתזה של הגדילים החדשים למתיחה עם החזרות, הנמצאות בין האתרים אליהם הם נקשרים. חזרות כאלה נקראות STR (Short Tandem Repeats, או "חזרות קצרות בסדרה"), והאזורים שבהם הם נמצאים מכונים "מיקרו לווינים".

DNA מיטוכונדריאלי

בנוסף לדנ"א הגנומי, הקיים בגרעין התאים, קיים גם דנ"א במיטוכונדריה, אברונים הנמצאים בציטופלזמה. ה- DNA הזה קטן בהרבה מגרעיני ובעל מבנה מעגלי, מה שהופך אותו יותר לזה של חיידקים.

בהקשר לניתוח פלילי, העניין ב- DNA מיטוכונדריאלי התעורר מכמה סיבות: ראשית, ה- DNA הזה מכיל גם אזורים פולימורפיים המאפשרים התאמה אישית; שנית, צאצאים מקבלים את ה- DNA הזה רק מהאם, מה שמאפשר להתחקות אחר השושלת האימהית של האדם; ושלישית, DNA זה עמיד יותר בפני השפלה מאשר DNA גרעיני. לפיכך, באסונות גדולים (שריפות, פיצוצים, תאונות מטוס וכו '), כאשר קשה יותר לזהות את הגופות, נותח את ה- DNA המיטוכונדריאלי. זה מופק מהשרידים ורצף העניין מושווה לרצפים שהתקבלו מאחים או אבות אמהיים.

מידת הביטחון בבדיקת DNA

נקודה אחת שיצרה דיון אינטנסיבי בקרב מעבדות וסוכנויות בדיקת DNA היא מספר המיקומים הפולימורפיים הדרושים בכדי לבסס אמינות זהות ואבהות. המדד המשמש למסקנות, הן על זהות האדם והן על אבהות, תלוי במספר המיקומים שניתחו. כדי להגיע לאינדקס הולם, עם זאת, יש לקחת בחשבון את תדירות האללים באוכלוסייה: אם הם נפוצים מאוד, תוצאות הניתוחים יהיו בלשון המעטה בספק.

ניתן להשתמש בקבוצות דם (A, B, O ו- AB) כדוגמה. קבוצות כאלה, התלויות בשילוב של אללים, מופצות באוכלוסיות ברחבי העולם בתדרים ידועים. בגרמניה 46% עד 48% סובלים מדם מסוג A. במרכז איראסיה, הודו, מונגוליה וסיביר, סוג B שורר. באף אחד מהאזורים הללו, אי אפשר היה להשתמש בקבוצות דם אלה בבידוד לזיהוי אדם, מכיוון שאחוז גדול מהאוכלוסייה יהיה כזה או אחר. חשוב שהאללים שנחקרו הם נדירים.

במקרה של פולימורפיזם DNA (RFLP), התדרים נמוכים בהרבה. כדוגמה, בואו נדמיין סכסוך אבהות בריו דה ז'ניירו שבו נעשה שימוש במוקד D10S28 בתור בדיקה המאפשרת להשיג אצל האב כביכול אלל המתרחש בכ -2.8% מאוכלוסיית ריו דה ז'ניירו. ערך זה גבוה מאוד אם ניקח בחשבון שאוכלוסיית העיר מונה כ- 8 מיליון תושבים. כדי להפחית ערך זה, יש צורך לחפש לוקוסים אחרים באותו אדם. בואו נדמיין שניתוח שני, תוך שימוש במוקד D2S44, גילה אלל בתדירות של 7.28%, אחוז המצביע על קיומם של 582,000 איש בריו דה ז'ניירו עם האלל הזה.

אך לכמה אנשים היו שני האללים? רק 16,307. מספר זה מתקבל על ידי הכפלת ההופכי של שני התדרים: 2.8 / 100 x 7.28 / 100 x 8 מיליון. באמצעות לוקוס אחד נוסף, הניתוח יציין תדר אחר, המאפשר לך להקטין עוד יותר את האחוז. בפועל, שימוש בחמש עד שבע בדיקות מייצר ערך נמוך מספיק כדי שהתוצאה תהיה חותכת.

מָקוֹר: בית ספר ברזיל - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm