Tapi bagaimana mengenali posisi fragmen? Untuk ini, perlu menggunakan "penyelidik", yaitu fragmen kecil DNA yang dilabeli dengan isotop radioaktif atau dengan radikal yang memancarkan cahaya dalam kondisi tertentu. Juga menjadi fragmen DNA, probe berisi urutan yang melengkapi hanya satu jenis urutan invarian yang sudah diketahui ada dalam fragmen yang diteliti, yang akan memungkinkan pengikatan keduanya.
Dengan menggunakan film fotografi, posisi probe dan, oleh karena itu, fragmen ditemukan. Dalam kasus situs situs tunggal - yang hanya terjadi sekali di seluruh genom - selalu ada dua "alel", karena sel (kecuali yang reproduktif) memiliki satu pasang setiap kromosom. Karena alel memiliki urutan dasar yang sama dan ukuran yang berbeda, probe yang melengkapi urutan itu akan mengikat keduanya dan mereka akan muncul di posisi yang berbeda pada film fotografi. Semua orang menerima salah satu dari alel ini dari ibu dan satu dari ayah.
Oleh karena itu, dalam tes paternitas, cukup membandingkan alel ibu, anaknya (a) dan ayah yang diduga, dan kebetulan alel ayah anak dengan alel ayah yang seharusnya akan mengkonfirmasi ayah "biologis". Ketika Anda hanya ingin menyelidiki identitas seseorang (penjahat, misalnya), Anda harus membandingkan pola polimorfisme sampel DNA yang diperoleh di TKP dengan pola beberapa tersangka.
Sintesis fragmen DNA
Untuk mendeteksi polimorfisme, digunakan primer yang mengapit daerah DNA di mana terdapat pengulangan nukleotida (dalam kelompok dua, tiga atau lebih) digunakan. Ini berarti bahwa primer semacam itu membatasi sintesis untaian baru pada regangan dengan pengulangan, yang terletak di antara tempat pengikatan mereka. Pengulangan seperti itu disebut STR (Short Tandem Repeats, atau "pengulangan pendek secara seri"), dan daerah di mana mereka ditemukan dikenal sebagai "mikrosatelit".
DNA mitokondria
Selain DNA genomik, terdapat dalam inti sel, juga terdapat DNA dalam mitokondria, organel yang terletak di sitoplasma. DNA ini jauh lebih kecil daripada nuklir dan memiliki struktur melingkar, yang membuatnya lebih mirip dengan bakteri.
Dalam konteks analisis forensik, ketertarikan pada DNA mitokondria muncul karena beberapa alasan: pertama, DNA ini juga mengandung wilayah polimorfik yang memungkinkan individualisasinya; kedua, keturunan menerima DNA ini hanya dari ibu, yang memungkinkan untuk melacak garis keturunan ibu seseorang; dan ketiga, DNA ini lebih tahan terhadap degradasi daripada DNA inti. Jadi, dalam bencana besar (kebakaran, ledakan, kecelakaan pesawat, dll.), ketika lebih sulit untuk mengidentifikasi mayat, DNA mitokondria dianalisis. Ini diekstraksi dari sisa-sisa dan urutan bunga dibandingkan dengan urutan yang diperoleh dari saudara kandung atau nenek moyang ibu.
Tingkat Keyakinan Pengujian DNA
Satu hal yang telah menghasilkan diskusi intens antara laboratorium dan lembaga pengujian DNA adalah jumlah lokus polimorfik yang diperlukan untuk membangun identitas dan paternitas secara andal. Indeks yang digunakan untuk kesimpulan, baik pada identitas seseorang maupun pada paternitas, tergantung pada jumlah lokus yang dianalisis. Namun, untuk sampai pada indeks yang memadai, perlu memperhitungkan frekuensi alel dalam populasi: jika mereka sangat umum, hasil analisisnya, paling tidak, meragukan.
Golongan darah (A, B, O dan AB) dapat digunakan sebagai contoh. Kelompok seperti itu, yang bergantung pada kombinasi alel, didistribusikan dalam populasi di seluruh dunia dengan frekuensi yang diketahui. Di Jerman, 46% hingga 48% memiliki golongan darah A. Di Eurasia Tengah, India, Mongolia dan Siberia, tipe B berlaku. Oleh karena itu, tidak satu pun dari wilayah ini yang dapat menggunakan golongan darah ini secara terpisah untuk mengidentifikasi individu, karena sebagian besar populasi akan memiliki satu atau yang lain. Adalah penting bahwa alel yang diselidiki jarang.
Dalam kasus polimorfisme DNA (RFLP), frekuensinya jauh lebih rendah. Sebagai contoh, mari kita bayangkan perselisihan paternitas di Rio de Janeiro di mana lokus D10S28 digunakan sebagai penyelidikan, memungkinkan untuk memperoleh, pada ayah yang seharusnya, sebuah alel yang terjadi pada sekitar 2,8% dari populasi Rio de Janeiro. Nilai ini sangat tinggi jika dilihat dari jumlah penduduk kota ini sekitar 8 juta jiwa. Untuk mengurangi nilai ini, perlu dicari lokus lain pada individu yang sama. Mari kita bayangkan bahwa analisis kedua, menggunakan lokus D2S44, mengungkapkan alel dengan frekuensi 7,28%, persentase yang menunjukkan keberadaan 582.000 orang di Rio de Janeiro dengan alel ini.
Tetapi berapa banyak individu yang memiliki kedua alel tersebut? Hanya 16.307. Angka ini diperoleh dengan mengalikan kebalikan dari dua frekuensi: 2,8/100 x 7,28/100 x 8 juta. Menggunakan satu lokus lagi, analisis akan menunjukkan frekuensi lain, memungkinkan Anda untuk mengurangi persentase lebih jauh. Dalam prakteknya, menggunakan lima sampai tujuh probe menghasilkan nilai yang cukup rendah untuk hasil yang konklusif.
Sumber: Sekolah Brasil - https://brasilescola.uol.com.br/biologia/sintese-fragmentos-dna.htm