Jak ale rozpoznat polohu fragmentů? K tomu je nutné použít „sondu“, tj. Malý fragment DNA značený radioaktivním izotopem nebo radikálem, který za určitých podmínek emituje světlo. Jelikož je také fragmentem DNA, sonda obsahuje sekvenci, která doplňuje pouze jeden typ invariantní sekvence již známé ve fragmentu, který je předmětem studie, což umožní vazbu obou.
Při použití fotografického filmu je objevena poloha sondy, a tedy i fragmentu. V případě míst s jedním místem - která se v celém genomu vyskytují pouze jednou - vždy existují dvě „alely“, protože buňky (kromě reprodukčních) mají jeden pár každého chromozomu. Vzhledem k tomu, že alely mají stejnou základní sekvenci a různé velikosti, sonda komplementární k této sekvenci se váže na obě a objeví se v různých pozicích fotografického filmu. Všichni lidé dostávají jednu z těchto alel od matky a jednu od otce.
V testu otcovství tedy stačí porovnat alely matky, jejího dítěte (a) a domnělého otce a shoda otcovské alely dítěte s alelou domnělého otce potvrdí otcovství "biologický". Pokud chcete vyšetřit pouze totožnost osoby (například zločince), musíte porovnejte vzor polymorfismu vzorků DNA získaných na místě činu s vzory několika podezřelí.
Syntéza fragmentů DNA
K detekci polymorfismu se používají primery, které lemují oblasti DNA, kde jsou nukleotidové repetice (ve skupinách po dvou, třech nebo více). To znamená, že takové primery vymezují syntézu nových řetězců do úseku s opakováním, umístěnými mezi místy, na která se vážou. Taková opakování se nazývají STR (krátká tandemová opakování neboli „krátká opakování v sérii“) a oblasti, kde se nacházejí, jsou známé jako „mikrosatelity“.
mitochondriální DNA
Kromě genomové DNA přítomné v jádru buněk existuje také DNA v mitochondriích, organelách umístěných v cytoplazmě. Tato DNA je mnohem menší než jaderná a má kruhovou strukturu, díky níž se podobá spíše bakteriím.
V kontextu forenzní analýzy vzrostl zájem o mitochondriální DNA z několika důvodů: za prvé, tato DNA také obsahuje polymorfní oblasti, které umožňují její individualizaci; zadruhé, potomci dostávají tuto DNA pouze od matky, což umožňuje dohledat mateřskou linii člověka; a za třetí, tato DNA je odolnější vůči degradaci než jaderná DNA. Při velkých katastrofách (požáry, výbuchy, letecké nehody atd.), Kdy je obtížnější identifikovat těla, je tedy analyzována mitochondriální DNA. Toto je extrahováno z ostatků a sledovaná sekvence je porovnána se sekvencemi získanými od sourozenců nebo předků z matčiny strany.
Nepřestávejte... Po reklamě je toho víc;)
Stupeň spolehlivosti testování DNA
Jedním bodem, který vyvolal intenzivní diskusi mezi laboratořemi a agenturami pro testování DNA, je počet polymorfních lokusů potřebných ke spolehlivému stanovení identity a otcovství. Index použitý pro závěry, a to jak o totožnosti osoby, tak o otcovství, závisí na počtu analyzovaných lokusů. K dosažení adekvátního indexu je však nutné vzít v úvahu frekvenci alel v populaci: jsou-li velmi časté, budou výsledky analýz přinejmenším pochybné.
Jako příklad lze použít krevní skupiny (A, B, O a AB). Takové skupiny, které jsou závislé na kombinaci alel, jsou distribuovány v populacích po celém světě se známými frekvencemi. V Německu má 46% až 48% krev typu A. Ve střední Eurasii, Indii, Mongolsku a na Sibiři převažuje typ B. V žádné z těchto oblastí by tedy nemohly být tyto krevní skupiny použity izolovaně k identifikaci jednotlivce, protože velké procento populace by mělo jednu nebo druhou. Je důležité, aby vyšetřované alely byly vzácné.
V případě polymorfismů DNA (RFLP) jsou frekvence mnohem nižší. Jako příklad si představme spor o otcovství v Rio de Janeiru, kde se používá lokus D10S28 jako sonda umožňující získat u domnělého otce alelu, která se vyskytuje u přibližně 2,8% populace Rio de Janeiro. Tato hodnota je velmi vysoká, pokud vezmeme v úvahu, že počet obyvatel města je přibližně 8 milionů. Pro snížení této hodnoty je nutné hledat další loci u stejného jedince. Představme si, že druhá analýza pomocí lokusu D2S44 odhalila alelu s frekvencí 7,28%, což je procento, které naznačuje existenci 582 000 lidí v Riu de Janeiru s touto alelou.
Ale kolik jedinců by mělo obě alely? Pouze 16 307. Toto číslo se získá vynásobením inverzní frekvence dvou frekvencí: 2,8 / 100 x 7,28 / 100 x 8 milionů. Při použití dalšího lokusu bude analýza indikovat další frekvenci, což vám umožní dále snížit procento. V praxi použití pěti až sedmi sond generuje dostatečně nízkou hodnotu, aby byl výsledek přesvědčivý.
